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百日咳桿菌毒素 IgM ELISA：酶聯(lián)法定性及定量測定人血清或血漿中百日咳博德特氏菌（Bordetella pertussis）毒素（PT） IgG 抗體水平?；趭A心法固相酶聯(lián)吸附檢測（ELISA）原理。微孔板空中包被抗原，樣品中含有針對抗原特異結(jié)合抗體（人IgG）則可以通過二次酶聯(lián)抗體（E-Ab）檢測到，加入顯色底物，酶解反應(yīng)顯色，顏色深淺與檢測吸附的 IgG 水平成正比，以此通過顏色判斷。
更新時間：2019-05-08
IBL百日咳桿菌IgM檢測試劑
1. 用途
酶聯(lián)法定性及定量測定人血清/血漿中百日咳桿菌毒素(PT) IgG 抗體水平。
百日咳是一種由百日咳博德特氏菌（Bordetella pertussis）引起的呼吸道疾病，可以通過空氣傳播傳播。 革蘭氏陰性桿菌會產(chǎn)生一系列生物活性分子，這些化合物或在致病或在針對百日咳的免疫過程中出現(xiàn)，并表現(xiàn)出不同的影響。其中百日咳毒素（pt）、絲狀血細胞凝集素（fha）和不同脂多糖（lps）等已進行了表征研究。
百日咳顯示高傳播率（未接種疫苗的家庭成員的感染率超過 90％）并且可導致嚴重疾病，特別是對于幼兒。從1980 年至 1989 年一年內(nèi)的 10749 名患者中，69％被送入醫(yī)院，22％患有肺炎，0.9％患有腦病，0.6％死于肺炎。對于年齡較大的兒童和成人（包括已接種疫苗的人）也通過不明顯支氣管炎或上呼吸道發(fā)炎觀察到感染。無癥狀的病例也很常見。
百日咳疾病或百日咳疫苗免疫后的血清學反應(yīng)采用凝集試驗、沉淀素，補體結(jié)合和酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA） 測定。 對于 ELISA 測定，博德特氏菌抗原（包括毒素，FHA 和 LPS, U/ml）與固相支持物結(jié)合，方法靈敏、易于操作，測定單一血清的血清陽性并通過測定IgM 和 IgA 來判斷近博德特氏菌感染情況。
與其他博德特氏菌屬蛋白相比，百日咳毒素（PT）具有高度特異性。 PT 也是眾多疫苗的組成部分。
基于夾心法固相酶聯(lián)吸附檢測（ELISA）原理。微孔板空中包被抗原，樣品中含有針對抗原特異結(jié)合抗體（人IgG）則可以通過二次酶聯(lián)抗體（E-Ab）檢測到，加入顯色底物，酶解反應(yīng)顯色，顏色深淺與檢測吸附的 IgG 水平成正比，以此通過顏色判斷樣品中IgG 的存在，并通過標曲定量測定IgG 的濃度水平。
1. 僅供研究專業(yè)用途使用。
2. 檢測前，完整仔細閱讀隨試劑盒內(nèi)附的有效版本說明書，確保充分理解全部內(nèi)容。
3. 若試劑盒包裝破損，請于收到試劑盒一周內(nèi)書面聯(lián)系 IBL 或供貨商。不要使用破損的試劑進行檢測。
4. 采用同批次同效期試劑進行檢測，不同批次的試劑不得混用。不要使用過期試劑。
5. 遵守良好實驗室操作規(guī)范及安全指南，必要時穿戴實驗服、一次性乳膠手套及護目鏡。
6. 試劑盒中有害成分接觸后可能刺激眼睛和皮膚。詳情見盒內(nèi)材料（MATERIALS SUPPLIED） 及標簽。另外，IBL 網(wǎng)上也提供了產(chǎn)品相關(guān)《Material Safety Data Sheets》供下載，或直接尋求 IBL 索取。
7. 化學品及制備或使用過的試劑必須當作有害廢物依照國家生物有害及安全指南或法規(guī)進行處理。
8. 清潔人員在處理潛在有害物品時應(yīng)有專業(yè)人士指導。
9. 避免接觸終止液，否則可能引起皮膚過敏及灼傷。
10. 部分試劑含疊氮鈉(NaN3) 防腐劑。若接觸眼睛或皮膚，立即用水沖洗。NaN3 可與鉛和銅管發(fā)生反應(yīng)形成具有爆炸性的疊氮金屬物。因此，處理試劑時，要用大量水沖洗避免疊氮物質(zhì)的積累。
11. 試劑盒中含有人血清或血漿的試劑均經(jīng)過檢測，顯示抗 HIV I/II、HBsAg 及 抗 HCV 均為陰性。盡管如此， 但不能排除這些及其他傳染因子的存在，因此使用及處理時，應(yīng)按潛在生物有害物處理。
5. 保存及穩(wěn)定性
試劑盒常溫條件運輸，保存應(yīng)在 2-8 °C。遠離熱源或陽光照射。樣本及制備試劑的保存與穩(wěn)定性在后面相應(yīng)章節(jié)有述。
未開封的試劑在注明的效期內(nèi)穩(wěn)定。試劑盒初次開封后，微孔板裝在密封袋密封及試劑瓶蓋緊放在 2-8 °C 可以穩(wěn)定保存 3 個月。
遵照常規(guī)靜脈采血注意事項。從采血開始直至檢測時段保持血樣化學屬性完整性是十分重要的。檢測時避免采用發(fā)生重度溶血、黃疸或嚴重脂血癥的樣品。外觀渾濁的樣品檢測前要進行離心去除顆粒物。 | |||
保存: | 2-8 °C | -20 °C | 遠離熱源和日光照射 |
穩(wěn)定性: | 7 天 | > 7 天 | 避免反復凍融 |
7. 試劑盒內(nèi)提供的物品 | |||
數(shù)量 | 標識 | 組分 | |||
1 x 12 x 8 | MTP | 微孔板 |
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可拆卸板條，包被有特定抗原。 |
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1 x 15 mL |
ENZCONJ IgG | 酶聯(lián) IgG |
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紅色瓶蓋，即用試劑。內(nèi)含：抗人 IgG 且偶聯(lián)過氧化物酶的抗體 | |||||
含蛋白的緩沖液, 0.01 %甲基異噻唑啉酮, 0.01 % 溴硝基二噁烷 | |||||
及 5 mg/L ProClin。 |
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1 x 4 x 2 mL |
CAL A-D
| 標準品 A-D |
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0; 25; 50; 150 IU/mL. 即用試劑。 |
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標準品 A = 陰性對照 | 標準品 B = 閾值判斷對照 | ||||
標準品 C = 弱陽性對照 | 標準品 D = 陽性對照 | ||||
標準品按單位 (IU) WHO 標準 06/140 進行過校正 | |||||
內(nèi)含： 抗百日咳毒素(PT)的 IgG 抗體及 PBS 稀釋過的人血清、 | |||||
0.01 %甲基異噻唑啉酮及 0.01 %溴硝基二噁烷。 | |||||
1 x 60 mL | DILBUF | 稀釋緩沖液 |
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即用試劑。內(nèi)含： PBS 緩沖液、BSA, < 0.1 % NaN3。 | |||||
1 x 60 mL | WASHBUF |
| CONC | 濃縮洗液 (10x) |
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內(nèi)含: PBS 緩沖液、吐溫 20。 |
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1 x 15 mL | TMB SUBS | TMB 底物液 |
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即用試劑，內(nèi)含四甲基聯(lián)苯胺（TMB）。 | |||||
1 x 15 mL | TMB STOP | TMB 終止液 |
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即用試劑， 0.5 M H2SO4. |
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2 x | FOIL | 粘性鋁箔 |
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供孵育時蓋住微孔板使用。 |
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1 x | BAG | 塑料袋 |
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密封袋，用于未使用板條的干燥保存。 | |||||
1. 微量移液器 (Eppendorf 多通道移液器或類似產(chǎn)品, < 3% CV)，量程： 5、 50、100、500 µL
2. 校正過的檢測裝置
3. 用于樣品稀釋的管子 (1 mL)
4. 8 通道微量移液器，及試劑儲槽
5. 洗瓶、自動或半自動洗板機
6. 酶標儀，可以讀取 450 nm (校正波長 600-650 nm) 的吸光值
7. 雙蒸水或去離子水
8. 吸水紙巾、移液槍頭、計時器
1. 任何不當處理樣品或修改測試程序都可能影響結(jié)果。 要求的移液量、孵育時間、溫度和預處理步驟必須嚴格按照說明書進行。 僅使用經(jīng)過校準的移液器和檢測設(shè)備。
2. 測試開始后，所有步驟都應(yīng)該不間斷地完成。 確保在適當?shù)臅r間準備好所需的試劑、材料和設(shè)備。 允許所有試劑和樣品達到室溫（18-25oC），并在使用前輕輕旋轉(zhuǎn)每瓶液體試劑和樣品。 混合試劑不要起泡。
3. 避免污染試劑，移液器和孔/管。 為每個組份和樣品移取時使用新的一次性塑料移液器吸頭。 瓶蓋不要互換。未使用的試劑瓶要始終蓋上。 不要使用用過的板孔/試管或試劑。
4. 使用移液方案驗證合適的板布局。
IBL百日咳桿菌IgM檢測試劑
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